Uso y cuidado de la columna de HPLC (Inertsil)

Instrucciones básicas de funcionamiento y cuidado recomendado de las columnas de HPLC INERTSIL®

Los empaques de HPLC Inertsil® están sujetos a una serie rigurosa de pruebas de control de calidad en una instalación que cumple con la norma ISO 9001, con especial énfasis en la pureza del reactivo, la trazabilidad de la materia prima y la consistencia en las materias primas y los productos finales. Un análisis detallado de todas las propiedades físicas y químicas de Inertsil®, combinado con pruebas de selectividad cromatográfica y eficiencia de empaquetamiento de columna, garantiza que cada lote de Inertsil® sea idéntico a todos los lotes anteriores y que la reproducibilidad de columna a columna sea la mejor. orden más alto. Para mantener y maximizar el rendimiento máximo de las columnas de HPLC Inertsil® y garantizar una larga vida útil y estabilidad de las columnas, lea las siguientes instrucciones antes de su uso.

DESEMBALAJE

Inspeccione la columna al recibirla y comuníquese con GL Sciences ([email protected] o 310-265-4424) de inmediato si observa signos de daños en el producto o en el empaque del producto que puedan haber ocurrido durante el envío.

SOLVENTES DE ENVÍO

Las columnas Inertsil® se envían con el solvente utilizado para la prueba de control de calidad final de la columna, como se detalla en el cromatograma de prueba entregado con la columna. Cuando se prepare para introducir la fase móvil deseada en una nueva columna, tenga en cuenta la miscibilidad de los disolventes que se introducen en la columna y el disolvente dentro de la columna. Si el nuevo eluyente que se introduce contiene sales de tampón, se recomienda enjuagar la columna con un eluyente altamente acuoso (como 90:10 Agua:MeCN) antes de introducir el tampón, para evitar la precipitación de sales en la columna. Para mayor precaución, introduzca nuevos eluyentes tamponados SIN el componente tampón para 5-10 volúmenes de columna y luego cambie a la composición de eluyente totalmente tamponada. ¡La precipitación de sales tampón en las columnas es esencialmente irreversible y destruye la columna! Al cambiar entre disolventes con polaridades muy diferentes, puede que sea necesario purgar primero la columna con un disolvente miscible entre sí, como alcohol isopropílico o dioxano, a un caudal reducido (aproximadamente el 50 % del normal). Se recomienda enjuagar con un mínimo de 5 volúmenes de columna (p. ej., 10 ml para una columna de 150 x 4,6 mm de DI).

Nota: Con Inertsil® SIL-100A, lleva mucho tiempo enjuagar el tampón o el agua en los poros del relleno después de usar el eluyente de fase inversa. De hecho, es casi imposible eliminar el agua de la superficie de una columna de sílice y una vez que el agua se adsorbe en la superficie, la selectividad de la columna se altera posteriormente. (Si se realiza un análisis posterior en el modo de fase normal y el lavado no se ha completado por completo, el orden de elución y el tiempo de retención pueden variar considerablemente). Por lo tanto, este tipo de columna debe usarse únicamente para un tipo de análisis (básicamente, fase normal). Si desea usar fase inversa en una columna polar, recomendamos CN, Diol o Amino.

CUIDADO DE LA COLUMNA

No deje caer ni golpee las columnas, ya que esto puede romper la uniformidad del lecho y dar como resultado colas o picos divididos.

Eluyente pH : las columnas de HPLC InertSustain® de GL Sciences están diseñadas para usarse entre pH 1,5 y 10,0, y se sabe que proporcionan una buena estabilidad incluso a pH cercano a 11. Otras columnas Inertsil®, como ODS-2, ODS-3 y ODS -4 proporciona una vida útil óptima cuando se utiliza con eluyentes dentro del rango de pH de 2,0 a < 8. A un pH superior a 8, los geles de sílice comienzan a disolverse; a un pH ácido por debajo de 2,0, ciertas fases ligadas (particularmente CN) se hidrolizan y puede ocurrir una pérdida gradual de la fase ligada. Si bien muchos clientes usan las columnas fuera de ambos lados del espectro de pH con excelentes resultados y una buena vida útil de la columna, las mejores vidas útiles generalmente se obtienen en condiciones de pH intermedio. Uno de los beneficios de la desactivación extrema de bases de Inertsil es la capacidad de analizar compuestos altamente polares en su pKa sin colas en los picos.

Presión : para maximizar la vida útil de la columna, opere a presiones de hasta 20 MPa (~ 3000 psi) para las fases de HPLC estándar (las columnas de UHPLC se pueden usar a presiones más altas, como se indica en el cromatograma de prueba). Temperatura de la columna: para maximizar la vida útil de la columna, limite la temperatura de la columna a 60 °C. Disolución de la muestra: las muestras deben disolverse en el eluyente o en un solvente más débil que el eluyente, lo que ayuda a evitar la precipitación de la muestra en la cabeza de la columna y valores de retención inconsistentes. Filtre la muestra con una membrana de 0,45 μ para eliminar las partículas antes de la inyección. Disolventes: utilice disolventes de grado de espectroscopia o HPLC que hayan sido fi ltrados a través de un fi ltro de 0,45 μ. Filtre todas las soluciones tampón antes de usarlas. Evite la introducción de partículas en la columna a toda costa.

Temperatura de la columna : para maximizar la vida útil de la columna, limite la temperatura de la columna a 60 °C.

Disolución de la muestra : las muestras deben disolverse en el eluyente o en un solvente más débil que el eluyente, lo que ayuda a evitar la precipitación de la muestra en la cabeza de la columna y valores de retención inconsistentes. Filtre la muestra con una membrana de 0,45 μ para eliminar las partículas antes de la inyección.

Disolventes : utilice disolventes de grado de espectroscopia o HPLC que hayan sido fi ltrados a través de un fi ltro de 0,45 μ. Filtre todas las soluciones tampón antes de usarlas. Evite la introducción de partículas en la columna a toda costa

PROTECCIÓN DE COLUMNAS

La instalación de un cartucho de protección ORG Preclean de GL Sciences entre la bomba y el inyector elimina la contaminación orgánica del eluyente acuoso. Las precolumnas también ayudan a proteger las columnas analíticas más valiosas al unir los componentes de la muestra que no eluyen antes de que la columna analítica se contamine.

ALMACENAJE DE COLUMNAS

Después de usar la columna con eluyente que contiene tampón o reactivo de par iónico, lave completamente la columna con un eluyente sin sal antes de guardarla. Cuando almacene la columna durante un período prolongado, guárdela en un solvente 100 % orgánico. MeCN es el solvente más comúnmente usado, aunque también se usan comúnmente alcohol isopropílico y MeOH. Selle la columna con los tapones proporcionados y guárdela en un lugar con una temperatura estable. Las columnas Inertsil® se fabrican, inspeccionan, empaquetan y envían bajo estrictos estándares de control de calidad. Si encuentra algún defecto de funcionamiento, póngase en contacto con su proveedor de GL Sciences, que se asegurará de su completa satisfacción. Sin embargo, lamentamos no poder garantizar la vida útil de las columnas, ni aceptar ninguna reclamación cuando su rendimiento se haya deteriorado debido al incumplimiento de las instrucciones de funcionamiento anteriores o como resultado del envejecimiento normal.

PROBLEMAS COMUNES A EVITAR EN LA INSTALACIÓN

Si hay picos de cola al principio de la elución, la causa probablemente sea el volumen muerto, más comúnmente causado por una conexión de ajuste de poro entre el inyector y la columna. Verifique que la línea de suministro de conexión esté correctamente insertada hasta el final en la junta de la columna. Las tuberías al inyector y al detector deben ser lo más cortas y tener el diámetro interior más pequeño posible. Las conexiones y tuberías subóptimas tienen efectos negativos cada vez mayores a medida que se reduce el diámetro de la columna.

La deriva y el ruido de la línea de base pueden deberse a un funcionamiento defectuoso de la bomba debido a las burbujas de aire o a la reducción de la intensidad de la luz cuando se utiliza un detector UV. Las burbujas a menudo ocurren durante el análisis a alta temperatura o cuando hay problemas con la pureza del solvente.

La causa más común de aumentos de la contrapresión de la columna o picos dobles es el bloqueo de la frita de entrada por partículas de la muestra, ya sea del analito/matriz o partículas creadas por el envejecimiento de los sellos de la bomba, o grandes cantidades de compuestos lipofílicos que se adsorben en la cabeza de la columna. Pase el eluyente a través de un fi ltro de membrana de 0,45 μ antes de su uso. La columna también se puede proteger de la contaminación mediante el uso de una precolumna/cartucho.